Anticorps anti-HLA : méthodes cellulaires et crossmatch
La recherche et l'identification des anticorps anti-HLA (Human Leukocyte Antigen) sont au coeur de la prise en charge de la réponse immunitaire humorale en transplantation d'organes. La source d'antigènes HLA la plus accessible, la plus évidente et la plus fiable pour la réalisation de ces examens est représentée par les cellules exprimant naturellement le HLA. Les lymphocytes T, qui expriment la classe I, et les lymphocytes B, qui expriment en plus la classe II, sont le plus facilement accessibles et sont donc utilisés en routine. La microlymphocytotoxicité (LCT), dont le principe repose sur l'activation de la cascade du complément par le complexe immun, ainsi que la cytométrie en flux (CMF), technique fondée sur la détection du complexe immun grâce à un conjugué fluorescent, sont les 2 méthodes les plus répandues utilisant un support antigénique cellulaire. Les antigènes HLA cellulaires peuvent aussi être extraits à partir de lysats cellulaires par les techniques de crossmatch acellulaire qui sont aujourd'hui d'utilisation très marginale.
Liens d'interêts
V.D. Kheav, M. Labalette, M. Filloux et N. Guillaume déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts.
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Figure 1. Principe du crossmatch en lymphocytotoxicité (LCT).
Figure 2. Principe du crossmatch en cytométrie en flux (CMF).
Figure 3. Principe du crossmatch en technique Luminex®.
Figure 4. Principe du crossmatch en ELISA. Une microplaque est le support de l’antigène.
| Anticorps cytotoxiques via le complément |
Isotypes Ig détectés |
Anticorps spécifiques du HLA | Avantages et caractéristiques | Interférence possible d’anticorps thérapeutiques | |
|---|---|---|---|---|---|
| LCT | Oui | G, M | Non | Technique de référence dans le contexte de l’urgence (donneurs décédés) |
Oui |
| CMF | Non | G, M, A | Non | Technique la plus sensible, considérée comme la référence pour les transplantations à partir de donneurs vivants | Oui |
| Luminex® | Non | G | Oui | Sensibilité intermédiaire entre la LCT et la CMF | Non |
| ELISA | Non | G, M, A | Oui | Peut être utile rétrospectivement, utilise des lysats de cellules du donneur |
Non |
LCT : lymphocytotoxicité ; CMF : cytométrie en flux.
| MFI du DSA anti-HLA | Méthode de crossmatch* | Risque de rejet humoral | ||
|---|---|---|---|---|
| LCT | Virtuel | CMF | ||
| +++ – | Positif | Positif | Positif | Élevé et précoce (heures à jours) |
| Négatif | Positif | Positif | Modéré et tardif (semaines à mois) | |
| Négatif | Positif/négatif** | Positif | Faible | |
| Négatif | Positif/négatif** | Négatif | Très faible | |
| Négatif | Négatif | Négatif | Très faible | |
* Ce tableau n’est applicable que pour les antigènes HLA, les seuls antigènes analysés par le crossmatch virtuel. **Le résultat dépend du seuil de MFI fixé pour considérer positif un crossmatch virtuel et de la nature de la cible antigénique. MFI : Mean Fluorescence Intensity ; LCT : lymphocytotoxicité ; CMF : cytométrie en flux ; DSA : Donor-Specific Antibody.
